SARS-CoV-2 Kit per il test degli acidi nucleici

Uso previsto:

Il kit per il test dell'acido nucleico SARS-CoV-2 si applica al rilevamento qualitativo dell'acido nucleico di COVID-19 in tamponi nasofaringei, tamponi orofaringei ed espettorato. I risultati del test forniscono una base per la diagnosi molecolare per l'infezione o per i pazienti sospetti e non devono essere utilizzati come unico criterio per la diagnosi clinica.

Materiali:

Procedura di prova:

A. Preparazione del campione

L'RNA estratto è il materiale di partenza per il kit per il test degli acidi nucleici SARS-CoV-2.

Importante: ogni procedura di estrazione dell'acido nucleico deve essere eseguita simultaneamente con un controllo positivo (40 μL, diluire con soluzioni saline sterili/PBS al volume desiderato) e un controllo negativo (40 μL, diluire con soluzioni saline sterili/PBS al volume desiderato).

Si consiglia di utilizzare i seguenti kit commerciali di estrazione dell'acido nucleico: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Mini kit di RNA virale (QIAGEN); Kit TIANamp Hi-DNA/RNA (TIANGEN);

B. Impostazione della miscela di reazione

1. Tutti i reagenti ei campioni devono essere scongelati completamente, miscelati completamente e centrifugati brevemente a temperatura ambiente (intervallo tra 18 e 25 gradi circa) prima dell'uso.

2. Preparare il volume richiesto della miscela di reazione in una provetta per microcentrifuga in polipropilene di dimensioni adeguate.

3. Pipettare 25 µL della miscela di reazione in ciascun pozzetto richiesto di una piastra di reazione per pozzetti 96-ottica appropriata o di una provetta di reazione ottica appropriata.

C. Aggiunta del modello

1. Aggiungere 5 μL di RNA estratto da campioni/controllo positivo/controllo negativo. Il volume totale è di 30 μl.

2. Miscelare accuratamente i campioni ei controlli con la miscela di reazione pipettando su e giù/vortex.

3. Chiudere la 96-piastra di reazione con i coperchi appropriati o una pellicola adesiva ottica e le provette di reazione con i coperchi appropriati.

4. Centrifugare la 96-piastra di reazione in una centrifuga con un rotore per micropiastre per 30 secondi a circa 2500 giri/min.

D. Programmazione dello strumento PCR in tempo reale

Per le informazioni di base relative all'impostazione e alla programmazione dei diversi strumenti per PCR in tempo reale, fare riferimento al manuale utente del rispettivo strumento. Il test è stato ottimizzato per il sistema ABI7500 per PCR in tempo reale. La corsa PCR viene eseguita con condizioni di ciclo come descritto nella tabella seguente.

Definire i rivelatori di fluorescenza

*Impostare il riferimento interno della fluorescenza dello strumento su "Nessuno", ad esempio: Per gli strumenti della serie ABI impostare "Riferimento passivo" su "Nessuno".

E. Analisi dei dati

Si prega di impostare i parametri di analisi e analizzare i dati secondo le istruzioni per l'uso dei relativi strumenti.

Prendi ABI 7500 come esempio:

La linea di base deve essere impostata su un intervallo che elimini la fluorescenza di fondo riscontrata nei primi cicli di amplificazione, ma che non si sovrapponga all'area in cui i segnali di amplificazione salgono al di sopra dello sfondo (valore iniziale: 3~10; valore finale: {{2} }). La soglia del ciclo (Ct) dovrebbe trovarsi alla base della fase esponenziale. Fare clic su "Analisi" per ottenere automaticamente il risultato dell'analisi e leggere il risultato del rilevamento nella finestra "Report".

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