Secrezione nasale del test rapido dell'adenovirus

Uso previsto:

Il kit per il test dell'acido nucleico SARS-CoV-2 si applica alla rilevazione qualitativa dell'acido nucleico di COVID-19 in tamponi rinofaringei, tamponi orofaringei ed espettorato. I risultati del test forniscono una base per la diagnosi molecolare dell'infezione o dei pazienti sospetti e non devono essere utilizzati come unico criterio per la diagnosi clinica.

Materiali:

Procedura di prova:

A. Preparazione del campione

L'RNA estratto è il materiale di partenza per il kit per il test dell'acido nucleico SARS-CoV-2.

Importante: ogni procedura di estrazione dell'acido nucleico deve essere eseguita simultaneamente con un controllo positivo (40 μL, diluito con soluzioni saline sterili/PBS al volume desiderato) e un controllo negativo (40 μL, diluito con soluzioni saline sterili/PBS al volume desiderato).

Si consiglia di utilizzare i seguenti kit commerciali per l'estrazione dell'acido nucleico: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Mini kit di RNA virale (QIAGEN); Kit TIANamp Hi-DNA/RNA (TIANGEN);

B. Configurazione della miscela di reazione

1. Tutti i reagenti ei campioni devono essere scongelati completamente, miscelati completamente e centrifugati brevemente a temperatura ambiente (intervallo approssimativo da 18 a 25 gradi) prima dell'uso.

2. Preparare il volume richiesto della miscela di reazione in una provetta per microcentrifuga in polipropilene di dimensioni adeguate.

3. Pipettare 25 µL della miscela di reazione in ciascun pozzetto richiesto di una piastra di reazione con 96-pozzetto ottico appropriato o di una provetta di reazione ottica appropriata.

C. Aggiunta modello

1. Aggiungere 5 μL di RNA estratto da Campioni/Controllo positivo/Controllo negativo. Il volume totale è di 30 μL.

2. Miscelare accuratamente i campioni ei controlli con la miscela di reazione pipettando su e giù/vortex.

3. Chiudere la piastra di reazione 96-pozzetto con coperchi appropriati o pellicola adesiva ottica e le provette di reazione con coperchi appropriati.

4. Centrifugare la piastra di reazione 96-pozzetto in una centrifuga con un rotore per micropiastre per 30 secondi a circa 2500 giri/min.

D. Programmazione dello strumento PCR in tempo reale

Per informazioni di base relative all'impostazione e alla programmazione dei diversi strumenti per PCR in tempo reale, fare riferimento al manuale dell'utente del rispettivo strumento. Il test è stato ottimizzato per il sistema PCR in tempo reale ABI7500. La corsa PCR viene eseguita con condizioni cicliche come descritto nella tabella seguente.

Definire i rivelatori di fluorescenza

*Impostare il riferimento interno di fluorescenza dello strumento su "Nessuno", ad esempio: Per gli strumenti della serie ABI impostare "Riferimento passivo" su "Nessuno".

E. Analisi dei dati

Si prega di impostare i parametri di analisi e analizzare i dati secondo le istruzioni operative dei relativi strumenti.

Prendi ABI 7500 come esempio:

La linea di base deve essere impostata su un intervallo che elimini la fluorescenza di fondo riscontrata nei primi cicli di amplificazione, ma che non si sovrapponga all'area in cui i segnali di amplificazione salgono al di sopra del fondo (Valore iniziale: 3~10; Valore finale: {{2} }). La soglia del ciclo (Ct) dovrebbe essere alla base della fase esponenziale. Fare clic su "Analisi" per ottenere automaticamente il risultato dell'analisi e leggere il risultato del rilevamento nella finestra "Report".

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